ÈESKÁ UROLOGIE / CZECH UROLOGY – 4 / 2017

296 Ces Urol 2017; 21(4): 289–298 ORIGINÁLNÍ PRÁCE embryí. Cytometrické vyšetøení apoptózy spermií tak umožòuje vèas odhalit a léèit normozoosper- miky s rizikem nižší fertility. K vyšetøení fragmentace DNA ve spermiích jsme použili metodu TUNEL (11, 12). Stanovení fragmen- tace DNA metodou TUNEL patøí mezi prognosticky nejpøesnìjší metodu (7), nicménì je výraznì èasovì i finanènì nároènìjší v porovnání se stanovením apoptózy spermií. Vyšetøili jsme proto pouze èást pacientù – 65 mužù – a u 40 % z nich jsme zjistili vyšší hodnoty fragmentace DNA. Doporuèujeme vyšetøovat fragmentaci DNA spoleènì s apoptózou spermií, pokud je dodán èerstvý ejakulát, protože se oba testy vzájemnì informaènì potvrzují. Upacientù sménì než 30%apoptotických spermií jsme nezjistili pøekroèení fyziologické hranice fragmentace DNA. Vztah mezi fragmentací DNA a úspìšností me- tod asistované reprodukce se sledoval v desítkách klinických studií a v nìkolika metaanalýzách (7, 18). V pøípadì vysoké fragmentace DNA byl zjištìn nižší poèet tìhotenství, ale publikace se nesho- dují v tom, zda pouhá znalost fragmentace DNA staèí pro pøedpovìï úspìšnosti metod asistované reprodukce (7, 18). Jednou z pøíèin rozdílných zá- vìrù metaanalýz je fakt, že existují rùzné postupy v diagnostice fragmentace DNA. Kromì metody TUNEL se používá i cytometrická metoda SCSA (sperm chromatin structure assay) (4). Existují i mi- kroskopické metody stanovení fragmentace jako Comet assay nebo Hallo Sperm Assay (19). Fertilní lidské spermie použitelné pro pøirozené oplození vajíèka potøebují mít kvalitní akrozom. K detekci integrity akrozomu jsme použili protilát- ku proti intraakrozomálnímu proteinu oznaèova- nou jako Hs-8 (20). Vyšší prùmìrný poèet spermií s narušenou integritou akrozomu se vyskytoval u ApoHigh podskupin než u ApoLow podskupin jak u normozoospermikù (40,2 % vs. 23,9 %), tak u pacientù s patologickým spermiogramem (53,1 % vs. 35,2 %). Podobnì vyšší prùmìrný poèet spermií s nízkou integritou akrozomu stanovený prùtoko- vou cytometrií byl zjištìn u pacientù s astheno- zoospermií než u normozoospermikù také v práci Èapková et al. (21). Nízká integrita akrozomu se mùže vyskytovat u poškozených spermií, apoptotických spermií nebo u živých spermií, u kterých došlo k pøedèasné kapa- citaci. Kapacitace spermií se standardnì odehrává až v reprodukèním traktu ženy a je aktivována vyšší koncentrací ROS (14). Stimulátorem kapacitace mo- hou být také estrogeny, které aktivují estrogenové receptory na hlavièce spermií (22). Zpravidla jde o endogenní estrogeny produkované v organizmu ženy. Ale spermie mohou být aktivovány také exo- genními estrogeny, které jsou pøítomné v prostøedí, napø. v pitné vodì kontaminované hormonální anti- koncepcí. Negativní efekt exogenních estrogenù na kapacitaci spermií byl potvrzen na myším modelu. Jejich pùsobenímdošlo k pøedèasné aktivaci myších spermií již v nadvarleti a zvíøata vystavená exogen- ním estrogenùm byla ménì fertilní než kontrolní. Pøedpokládá se, že exogenní estrogeny mohou ovlivnit také fertilitu spermií mužù. Jaký je klinický pøínos cytometrického vyšetøení spermií? Test apoptózy spermií je používán na našem pracovišti jako screeningový test doplòu- jící spermiogram. Pøi opakovanì patologických výsledcích apoptózy spermií doporuèujeme paci- entovi andrologické vyšetøení. Pøíèin vysoké kon- centrace apoptotických spermií mùže být nìkolik napø. anatomická èi funkèní abnormalita, infekce, hormonální nerovnováha, genetická abnormalita nebo porucha imunity (6). Cílená specifická léèba, podpùrná léèba antioxidanty a zmìna životního stylu mohou pøispìt ke zlepšení kvality spermií, i když jsou souèasné možnosti léèby omezené. Doporuèujeme také sledování dynamiky pro- cesu – opakovaným vyšetøením apoptózy sper- mií mùžeme zachytit pokles poètu apoptotických spermií v pøípadì pozitivního efektu léèby. Naopak pøi vzestupu poètu apoptotických spermií stoupá napø. riziko pøítomnosti mikrobiální infekce. Stanovení apoptotických spermií mùže pomoci i pøi výbìru metody asistované reprodukce. Èasnì apoptotické spermie jsou špatnì mikroskopicky ro- zeznatelné od živých a mohou být omylempoužity na in vitro oplození (5). Kvalitní oocyt umí opravit poškozenou DNA, nicménì tato schopnost klesá u oocytù starších žen (23). Pro potøeby asistova- né reprodukce jsou vyvíjeny metody umožòující selekci spermií s kvalitní DNA. Jednou z možností je magnetická separace apoptotických spermií