75 / 100
321
Ces Urol 2016; 20(4): 317–325
ORIGINÁLNÍ PRÁCE
poškození DNA byl v každé buňce stanoven jako
procento vycestované DNA z celkového množ‑
ství DNA v jádře (Tail DNA). Z každého vzorku bylo
změřeno 500 buněk a z naměřených hodnot byl
spočítán medián, který charakterizoval kvalitu DNA
ve spermiích vyšetřovaného jedince. Obrázek 1 do‑
kumentuje vzhled „komet“ připravených ze spermií.
Halosperm
K přípravě preparátů jsme používali komerčně do‑
stupný kit (HalotechDNA, Španělsko) a při zpraco‑
vání vzorků jsme postupovali podle pokynů vý‑
robce. Po oschnutí preparátů bylo pod světelným
mikroskopem hodnoceno procentuální zastoupení
zdravých spermií (H), tj. spermií s intaktní DNA,
dále fragmentovaných spermií (F), tj. spermií s frag‑
mentovanou DNA a/nebo poruchou kondenzace
chromatinu, a degenerovaných spermií (D) v 500
buňkách/osobu (Obrázek 2).
Obr. 1.
Spermie zpracované kometovým testem.
Šipka ukazuje nukleoid spermie s nepoškozenou DNA,
trojúhelník nukleoid spermie s vysokým stupněm frag-
mentace DNA a hvězdička nukleoid somatické buňky,
pravděpodobně leukocytu
Fig. 1.
Sperm processed by comet assay. The arrow
indicates the nucleoid of sperm with intact DNA, the
triangle shows the sperm with a high degree of DNA
fragmentation and the asterisk shows the nucleoid of
somatic cells, presumably leukocyte
Obr. 2.
Spermie zpracované testem na disperzi
chromatinu – Halosperm. Bílá šipka ukazuje zdra-
vou spermii (H) s rozptýleným chromatinem kolem
hlavičky („halo“ efekt), černá šipka ukazuje spermii
s fragmentovanou DNA (F), černý trojúhelník spermii
degenerovanou (D)
Fig. 2.
Sperm processed by chromatin dispersion
assay (Halosperm). The white arrow indicates healthy
sperm (H) with a dispersed chromatin around the head
(„halo“ effect), the black arrow indicates the spermwith
fragmented DNA (F) and the black triangle shows the
degenerated sperm (D)
VÝSLEDKY
Porovnání výsledků získaných
kometovým testem a Halospermem
Korelační analýza potvrdila dobrou shodu mezi
výsledky obou metod, tj. nárůst v počtu spermií ka‑
tegorie F v Halospermu korespondoval s nárůstem
hodnot Tail DNA v kometovém testu (Obrázek 3).
Výsledky Halospermu navíc korelovaly s motilitou,
tj. se stoupajícím procentem pohyblivých sper‑
mií (kategorie a+b) stoupalo i procento spermií
s intaktní DNA (Obrázek 4a). Mezi výsledky kome‑
tového testu a motilitou se nám podobný vztah
prokázat nepodařilo (Obrázek 4b).
Porovnání integrity DNA ve spermiích
v jednotlivých skupinách
Výsledky hodnocení integrity DNA v jednotlivých
skupinách pacientů shrnuje tabulka 1. Při hodno‑
cení kometovým testem obě sledované skupiny
pacientů vykazovaly výrazně vyšší poškození DNA
ve spermiích než kontroly, zatímco s pomocí Ha‑